Скачать методичку по хемилюминесцентному методу

Мастер-класс: Методы измерения образования/содержания активных форм кислорода (АФК), в частности, пероксида водорода в биологических объектах (высшие растения) и в растворах.

Уровень содержания АФК в клетках служит одним из индикаторов функционального состояния растений в стрессовых условиях. Повышенное содержание АФК свидетельствует о протекании окислительного стресса, при этом АФК, в частности пероксид водорода, запускают клеточные сигнальные пути, что необходимо для приспособления и выживания растений в этих условиях. При накоплении АФК в больших количествах проявляется их токсичное действие.

Уровень содержания АФК в рамках мастер-класса будет определен несколькими методами: спектрофлуориметрическим, амперометрическим и хемилюминесцентным.

• Спектрофлуориметрический метод позволяет следить за флуоресценцией крестителей, которые при взаимодействии с АФК переходят во флуоресцентную форму.
• Амперометрический (полярографический) метод основан на измерении изменения содержания кислорода в ячейке, используя кислородный электрод Кларка.
• Хемилюминесцентный метод основан на измерении перекисного окисления люминола. Быстрое замораживание образца с помощью жидкого азота и дальнейшая обработка трихлоруксусной кислотой позволяют оценить уровень содержания пероксида водорода в изолированных структурах и целых листьях.

В рамках школы с помощью этих методов будут решены две задачи:
Задача 1: Определено влияние уровня освещенности растений на уровень образования АФК в листьях растений с целью установления интенсивности света, которая приводит к окислительному стрессу в растениях.
Задача 2: Сравнение содержания количества пероксида водорода в различных растворах: дистиллированная, водопроводная и бутилированная вода.

Вопросы по методам до начала школы направлять:
Борисова Мария Мансуровна к.б.н., в.н.с. лаборатории фотосинтетического электронного транспорта. Адрес для связи – mubarakshinamm@gmail.com