Скачать методичку
Анализ пигментов фотосинтезирующих организмов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Метод используется для определения качественного и количественного состава пигментов в фотосинтетических мембранах ряда бактерий.
Анализ пигментов проводится на колонке Spherisorb ODS2 5 мкм “Waters” (США). В качестве носителя в ней используется диоксид кремния с пришитой С18 алкильной группой, а содержание углерода составляет 11.5%.
Для разделения смеси пигментов применяется подход с постепенно увеличивающимся градиентом концентрации этилацетата. Для этого используются следующие растворы: Раствор «А»: 23% Этилацетат+77% раствора «С»; Раствор «B»: чистый этилацетат; Раствор «С»: ацетонитрил : вода – 9:1(V).
В начале анализа колонка уравновешена раствором «С». После нанесения пробы на колонку первые три минуты через неё пропускается раствор «А», затем данный раствор линейно замещается раствором «В» в течение 37 мин. И последние 3 мин через колонку пропускается чистый раствор «В». После проведения анализа колонку регенерируют, промывая раствором «С» в течение 20 минут.
Содержание пигментов оценивается исходя из площади полосы данного вещества на хроматограмме в области 415-550 нм, с помощью программы LC-solution (“Shimadzu”, Япония) и соответствующих коэффициентов экстинкции.
В рамках школы предлагается измерить содержание пигментов в фотосинтетических мембранах Alc. minutissimum с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Контакты: Большаков Максим Александрович. e-mail: lfbv22@gmail.com