Скачать методичку

Измерение нитрогеназной активности фотосинтезирующих азотфиксирующих микроорганизмов методом газовой хроматографии.

Метод используется в исследованиях нитрогеназной активности и выделения водорода биологическими объектами (цианобактерии, пурпурные бактерии).

Суть метода заключается в том, что исследуемую суспензию клеток помещают в герметичный сосуд с газовой фазой. Объем газовой фазы обычно составляет 80–95% объема сосуда. При необходимости сосуд термостатируют при заданной температуре, освещают. Суспензию перемешивают для увеличения контакта газовой и жидкой фазы. После начала реакции в жидкости накапливается водород, который переходит в газовую фазу в соответствии с законами равновесия. Через определенные промежутки времени отбирается газовая фаза (обычно 1–3% от общего объема), и состав газовой фазы анализируется с помощью газовой хроматографии. Строится кривая кинетики изменения содержания водорода в газовой фазе. Наклон прямолинейного участка кривой является скоростью выделения водорода. В зависимости от задачи скорость выделения рассчитывается на единицу объема (например, на мл суспензии), единицу активного вещества (грамм веса сухой биомассы, мг хлорофилла/бактериохлорофилла, мг белка и пр.), на единицу освещаемой поверхности в единицу времени.

В рамках школы предлагается измерить нитрогеназную активность по скорости фотовыделения водорода культурами пурпурной несерной бактерии Rhodobacter sphaeroides: штаммом дикого типа и мутантным штаммов, содержащим меньшее количество пигментов.

Контакты для вопросов по поводу метода: Ельцова Зинаида Александровна. e-mail: z.eltsova@gmail.com
научный сотрудник лаборатории биотехнологии и физиологии фототрофных организмов