Скачать методичку

Метод используется для изучения поглощения из ростовой среды или выделения в нее микроорганизмами перечисленных выше жирных кислот, а также для определения количества в микробной биомассе такого запасного вещества, как поли-β-гидроксибутират.

Основной принцип метода. Газо-жидкостная хроматография разделения (ГЖХ, ГЖРХ) – тип газовой хроматографии, используемой в аналитической химии для разделения и анализа соединений, которые могут быть переведены в газообразное состояние без их разложения. В ГЖХ подвижной фазой служит газ: воздух, инертный газ (гелий, аргон) или нереактивный газ (азот, углекислый газ). А неподвижной фазой — жидкость, нанесенная тонким слоем (100 нм) на твердый носитель, который помещается в стеклянную или металлическую колонку с внутренним диаметром 0,2–0,6 см. Анализ начинается с взаимодействия перешедших в газообразное состояние соединений смеси с поверхностями колонки, которые покрыты неподвижной фазой. Это заставляет каждое из соединений двигаться по колонке различное время, известное как время удерживания вещества. Сравнение времен удерживания – это то, на чем основан данный аналитический метод. Газовая хроматография также подобна фракционной дистилляции, так как оба процесса отделяют компоненты смеси, прежде всего, на основе различий точки их кипения. Другими параметрами, которые могут использоваться, чтобы изменить порядок или время удерживания вещества, являются: расход газовой смеси, длина колонки и температура. Поскольку соединения выходят из конца колонки, это позволяет детектировать и идентифицировать их в электронном виде с помощью хроматографических детекторов (например, пламенно-ионизационного, электронно-захватного и др.).

В рамках школы предлагается измерить концентрацию жирных кислот в ростовой среде микроорганизмов и количество накопленного клетками пурпурных бактерий поли-β-гидроксибутирата.
Для определения количества жирных кислот в образце клетки удаляют центрифугированием. Супернатант замораживают и хранят в морозильнике до проведения анализа. Перед проведением анализа пробу подкисляют до рН ≤ 3 с помощью 30% H₃PO₄ без дополнительной подготовки.
Для определения поли-β-гидроксибутирата в клетках биомасса обрабатывается ацетоном, полимерные молекулы собирают центрифугированием и проводят их деполимеризацию H₂SO₄ (или HCl), метелирование мономеров и определеняют продукт в образце.

Адрес для связи по возникшим вопросам: peteka2008@gmail.com